ISPITIVANJE NEUROPROTEKTIVNOG EFEKTA INHIBICIJE RO-KINAZE U ĆELIJSKOM MODELU NEURODEGENERACIJE IZAZVANOM 1-METIL-4-FENILPIRIDINIJUMOM (MPP+) - Blagojević, Sanja; Jeremić, Marija; Jovanović-Tucović, Maja (Medicinski podmladak, 2022)
Uvod: Model neurodegeneracije indukovan primenom 1-metil 4-fenil 1,2,3,6-tetrahidropiridijuma (MPTP) jedan je od najčešće korišćenih modela ove bolesti u ekperimentalnim uslovima. MPTP, tj. njegov metabolit MPP+, inhibira kompleks I u mitohondrijama, povećava proizvodnju slobodnih radikala što vodi ka depleciji ATP-a i ćelijskoj smrti. Inhibicija Ro-kinaze, enzima uključenog u regulaciju važnih procesa u ćeliji, kao što su organizacija citoskeleta, aksonogeneza, regulacija vezikularnog transporta, apoptoza, dovodi do njihovog poboljšanog preživljavanja. Cilj: Cilj ovog rada je bio ispitivanje efekta inhibicije Ro-kinaze u ćelijskom modelu neurodegeneracije izazvane MPP+-om, kao i uloga regulatonih kinaza i to protein kinaze B/Akt i adenozin monofosfatom aktivirane kinaze (AMPK) u tom procesu. Materijal i metode: Eksperimenti su rađeni na ćelijskoj liniji humanog neuroblastoma SH-SY5Y. MTT test je korišćen za određivanje vijabiliteta ćelija nakon tretmana MPP+-om inhibitorom Ro-kinaze, fasudilom. Za određivanje nivoa aktivacije proteina uključenih u kontrolu metaboličkih puteva, AMPK i Akt, korišćena je imunoblot metoda, a kvantifikacija je urađena denzitometrijom. Rezultati: Pokazali smo da tretman MPP+-om dovodi do pada vijabiliteta ćelija neuroblastoma u odnosu na kontrolne (netretirane) ćelije, dok se u uslovima pretretmana fasudilom uočava dozno-zavisni porast vijabiliteta u odnosu na tretman samo MPP+-om. Ispitivanje ciljnih proteina je pokazalo da u uslovima tretmana fasudilom i MPP+-om dolazi do značajanog porasta u aktivaciji Akt-a, dok nema značajnih promena u aktivaciji AMPK. Zaključak: Inhibicija Ro-kinaze, upotrebom fasudila, poboljšava preživljavanje ćelija neuroblastoma u uslovima citotoksičnog dejstva MPP+ neurotoksina i dovodi do aktivacije Akt/PI3K signalnog puta.