UTICAJ TEMPERATURE SKLADIŠTENJA NA KVALITET I KVANTITET DNK IZOLOVANE IZ LISTA KUKURUZA - Kostadinović, Marija; Ristić, Danijela; Lučev, Milica; Ignjatović Micić, Dragana; Vančetović, Jelena (Journal of Agricultural Sciences (Belgrade), 2024)
Cilj ovog istraživanja je bio ispitivanje efekta temperature skladištenja listova kukuruza i iz njih izolovane DNK na njen kvalitet i kvantitet radi efikasnog PCR umnožavanja. Listovi su uzeti sa biljaka starih četiri nedelje koji su podeljeni u tri grupe od 20 uzoraka. Prva grupa je analizirana odmah, dok su druge dve su čuvane 30 dana na -20°C i -80°C. DNK izolovana iz svežih listova je podeljena u tri grupe, od kojih je prva analizirana odmah, a druge dve su skladištene 30 dana na -20°C i -80°C. Kvalitet i kvantitet DNK određene su na biospektrofotometru, nakon čega su uzorci razblaženi za PCR. Kvalitet svih DNK uzoraka bila je na zadovoljavajućem nivou sa prosečnim vrednostima odnosa OD260/280 od 1.85 do 1.87. Koncentracija DNK koja je izolovana odmah iz svežih listova nije se statistički razlikovala od uzoraka koji su čuvani 30 dana. I kvalitet i kvantitet DNK u svim uzorcima bili su dovoljni za uspešno PCR umnožavanje pomoću dva molekularna markera specifična za opaque2 gen. Pomoću markera phi057 umnožen je fragment od 170bp kod QPM i 160bp kod linije koja nije QPM, dok je pomoću markera umc1066 dobijen fragment od 150bp kod QPM i 160-170bp kod ne-QPM. Rezultati su potvrdili da odgovarajući uslovi čuvanja ne utiču ni na kvalitet ni na kvantitet DNK. Ovo može biti korisno u selekciji pomoću molekularnih markera kada veliki broj uzoraka mora biti obrađen pre polinacije, što omogućuje selekcionerima da odbace biljke bez željenih alela i smanjuje obim populacije koju treba testirati.