STRUKTURNO MODELIRANJE, IZRAŽAVANJE I PREČIŠĆAVANJE HIMERIČNE KITINAZE42 KOJA SADRŽI HIS-TAG U SISTEMU DLAKASTOG KORENOVA NIKOTIANA TABACUM: STRUKTURNO MODELIRANJE, IZRAŽAVANJE I PROČIŠĆAVANJE - Motallebi, Mostafa; Soleimani, Faranak; Mohammadreza , Mohammadreza; Jourabchi, Esmat (Journal of Agricultural Sciences (Belgrade), 2023)
Himerna hitinaza42 (Chit42 koja sadrži ChBD) ima veliki potencijal kao kandidat za varenje i reciklažu hitina kao korisnog hranljivog materija, koji se može proizvesti u bioreaktorima. Biljka je jedan od efikasnih bioreaktora koji može da proizvodi eukariotske proteine u aktivnim oblicima. Odgovarajuću platformu za jednostavnu, ekonomičnu i brzu ekspresiju različitih rekombinantnih proteina obezbeđuje sistem dlakavog korena biljke. Zbog ogromne količine proteina u biljkama, His-tag se može koristiti za olakšavanje prečišćavanja rekombinantnih proteina. U ovom istraživanju korišćeni su različiti kompjuterski programi za analizu trodimenzionalne strukture himerne hitinaze42 koja sadrži His-tag. Rezultati su pokazali da ova uporedna modeliranja imaju izuzetan stepen tačnosti u predviđanju strukture fuzionisanog proteina. Z-skor od -9,38 i -3,64 predviđen za chit42 i CHBD od strane ProSA predstavlja dobar kvalitet modela. Takođe, bioinformatička zapažanja su pokazala da je His-tag bio izložen i da se može koristiti za prečišćavanje himerne hitinaze42. Himerna hitinaza42 koja sadrži His-tag je eksprimirana u Nicotiana tabacum dlakavim korenima, a istražena je uloga His-tag-a u detekciji vestern blot-om i prečišćavanjem pomoću Ni-NTA kolone. Prisustvo himerne hitinaze42 je verifikovano SDS-PAGE i Vestern blot analizom ekstrakta korena. Korak prečišćavanja je postignut korišćenjem His-tag i Ni-NTA kolone. Biološka aktivnost himerne hitinaze 42 biljnog porekla je potvrđena ispitivanjem hitinazne aktivnosti prečišćenog proteina na medijskoj ploči koja sadrži koloidni hitin.