Osnovni principi otkrivanja oštećenja DNK pomoću alkalnog komet testa - Živković, Lada; Topalović, Dijana; Djelić, Ninoslav; Popović, Petar; Marković, Milica; Gunjić, Ilija; Spremo-Potparević, Biljana (Arhiv za farmaciju, 2024)
Komet test je veoma osetljiva i brza metoda za otkrivanje oštećenja DNK na nivou pojedinačnih ćelija. Meri jednolančane i dvolančane DNK prekide, alkalno labilna mesta, mesta nepotpune ekscizione reparacije i mesta unakrsnog povezivanja. Značajna prednost komet testa je njegova primenjivost na proliferišuće i neproliferišuće ćelije, a može se primeniti na gotovo bilo kom tipu eukariotskih ćelija. Osnovni princip alkalnog komet testa uključuje ugradnju ćelija u agarozni gel praćen lizom ćelijskih membrana i uklanjanjem proteina kako bi se oslobodila ukupna DNK. Zatim se denaturiše DNK i podvrgava elektroforezi, nakon čega se vrši neutralizacija. Ćelije se boje različitim fluorescentnim bojama kako bi se obezbedila vizuelizacija i procena intenziteta nivoa DNK oštećenja koriščenjem fluorescentnog mikroskopa. Stepen elektroforetske migracije DNK vizuelizovane u vidu repa komete je srazmeran količini oštećenja DNK. Ključne prednosti komet testa su osetljivost – test može da otkrije niske nivoe DNK oštećenja, raznovrsnost – može se koristiti sa malom količinom test supstance i na različitim tipovima eukariotskih ćelija, brzina – rezultati su obično dostupni u roku od 24 do 48 sati i široka primenjivost – metoda je pogodna za više namena, uključujući molekularnu epidemiologiju, studije profesionalne izloženosti, biomonitoring životne sredine, procene antigenotoksičnosti i klinička istraživanja. Sve u svemu, komet test pruža vredne podatke u širokom spektru naučnih i kliničkih oblasti, što ga čini moćnim alatom za procenu DNK oštećenja.