ISTRAŽIVANJE p-SCN-Bn-DOTA-TRASTUZUMAB-a OBELEŽENOG RADIOAKTIVNIM I NERADIOAKTIVNIM LUTECIJUMOM I ITRIJUMOM: ZNAČAJAN KORAK ZA BUDUĆE PRIMENE - Arev, Marija; Mirković, Marija; Radović, Magdalena; Davalieva, Katarina; Makreski, Petre; Apostolova, Paulina; Vranješ-Djurić, Sanja; Dimovski, Aleksandar; Džodić, Predrag; Janevik-Ivanovska, Emilija (Arhiv za farmaciju, 2023)
Značaj leži u pripremi stabilnog, konjugata trastuzumaba korišćenjem neradioaktivnih LuCl3 i YCl3, preko p-SCN-Bn-DOTA. Ovaj pristup je ključan za određivanje potencijalnih fizičko-hemijskih promena u strukturi imunokonjugata nakon vezivanja metala. Nakon konjugacije, koristeći molarni odnos 1:20, izvedeno je sušenje zamrzavanjem da bi se dobili stabilni imunokonjugati za naknadnu analizu. Nekoliko hemijskih metoda je korišćeno da se karakteriše stabilnost antitela i zadržana imunoreaktivnost unutar formulisanih imunokonjugata. Dokaz integriteta proteina došao je iz SDS-PAGE elektroforeze, sa ujednačenim intenzitetom fragmenata (25 kDa za laki lanac, 50 kDa za teški lanac) što ukazuje na nerazgradnju antitela (1). IR i Ramanova spektroskopija su služile za verifikaciju sekundarnih strukturnih promena, uz prisustvo karakterističnih amidnih traka u oba spektra što ukazuje na zadržavanje prirodne sekundarne strukture (2). Koristeći MALDI-TOF-MS, određeno je 4,9 p-SCN-Bn-DOTA molekula po molekulu antitela. Obećavajući rezultati neradioaktivnog obeležavanja pružaju priliku za potencijalno obeležavanje radioaktivnim lutecijumom-177 i itrijumom-90, svaki sa specifičnom aktivnošću od 200 µCi/mL. Radioizotopi su inkubirani sa p-SCN-Bn-DOTA-trastuzumabom sat vremena na 40 ºC. Procena radiohemijske čistoće i stabilnosti je sprovedena korišćenjem ITLC-SG sistema. Optimalne mobilne faze, posebno 0,4 M metanol:natrijum acetat (1:1) za itrijum-90 i 0,9% NaCl za lutecijum-177, olakšale su detaljno ispitivanje. Postignuta je izuzetna efikasnost radioaktivnog obeležavanja, >96% za itrijum-90 i <99% za lutecijum-177. Procene stabilnosti posle 72 sata pokazale su veću stabilnost 177Lu-p-SCN-Bn-DOTA-trastuzumaba (<1,5% oslobađanja lutecijuma-177) u poređenju sa 90I obeleženim kolegom (<17% otpuštanje itrijuma-90). Ova studija naglašava uspešan razvoj radioimunokonjugata, pozicionirajući ovaj agens za potencijalnu primenu in vivo istraživanja.