Novi pristup u razvoju (U)HPLC gradijentnih metoda koji bi omogućio uspešan transfer - Protić, Ana; Milenković, Milan; Rašević, Marija; Otašević, Biljana; Zečević, Mira; Krmar, Jovana; Malenović, Andjelija (Arhiv za farmaciju, 2022)
U današnje vreme, jedan od važnih zahteva prilikom razvoja hromatografskih metoda jeste da se razvoj uradi brzo, da vreme trajanja hromatografske analize bude kratko i da se obezbedi dug životni ciklus metode. Posebnu pažnju treba obratiti na (U)HPLC metode sa gradijentnim eluiranjem kod kojih se često javljaju problemi prilikom međulaboratorijskog transfera. Glavni razlog za zahtevan transfer gradijentnih (U)HPLC metoda je razlika u vrednostima dwell volume između (U)HPLC uređaja. Cilj ovog rada je bio da predloži novu metodologiju razvoja gradijentnih (U)HPLC metoda, pri čemu će vrednosti dwell volumes biti integrisane sa drugim ulaznim promenljivama u fazi optimizacije. Ovo bi bio posebno koristan pristup u industriji gde se obično zna na kojim će sve (U)HPLC instrumentima metoda biti korišćena. Metodologija je testirana na smeši dabigatran eteksilat mezilata i njegovih devet nečistoća. Za razvoj metode korišćen je eksperimentalni dizajn i tri različita (U)HPLC instrumenta sa značajnim razlikama u dwell volume vrednostima. Statistički značajne ulazne promenljive su dobijene primenom Plackett-Burman dizajna, i zajedno sa vrednostima dwell volume su bile uključene u D-opimal dizajn. Kriterijum razdvajanja s između susednih parova pikova odabran je kao odgovor u odnosu na koji je metoda optimizovana. Indirektno modelovanje zajedno sa Monte Karlo simulacijom omogućilo je izbor optimalnih i robusnih hromatografskih uslova zajedničkih za sva tri instrumenta. Oni su uključivali 24% (v/v) početnog udela acetonitrila, 54% (v/v) finalnog udela acetonitrila, vreme trajanja gradijenta od 15 minuta i pH vrednost 4,9. Primenljivost predložene metodologije je dokazana, jer je dobijena metoda uspešno validirana na sva tri (U)HPLC instrumenta.